隨著分子生物學和細(xi)胞生物學研(yan)(yan)(yan)究的(de)不斷(duan)發(fa)展，轉(zhuan)染(ran)(ran)已經成為(wei)研(yan)(yan)(yan)究和控(kong)制(zhi)真核細(xi)胞基(ji)因(yin)功能的(de)常規工具。細(xi)胞轉(zhuan)染(ran)(ran)實驗是現代(dai)生物學研(yan)(yan)(yan)究中的(de)重要技(ji)術手段。通過(guo)(guo)將外源DNA、RNA、蛋白(bai)質等(deng)引入(ru)目(mu)標(biao)細(xi)胞的(de)實驗技(ji)術，研(yan)(yan)(yan)究者(zhe)們可以揭(jie)示細(xi)胞的(de)基(ji)因(yin)功能、蛋白(bai)質表達和相互(hu)作用，進而深入(ru)理(li)解(jie)細(xi)胞生理(li)過(guo)(guo)程和疾病發(fa)生機制(zhi)。接下來我來為(wei)大家介紹一下常見(jian)的(de)細(xi)胞轉(zhuan)染(ran)(ran)方法吧
細胞轉染(ran)方法
1. 化學物質介導：磷酸(suan)鈣共(gong)沉淀法(fa)、陽離(li)子聚合物法(fa)和脂質體(ti)轉(zhuan)染(ran)方法(fa)
1）磷(lin)酸鈣(gai)共沉淀(dian)(dian)法(fa)：借助于(yu)形(xing)成一種DNA-磷(lin)酸鈣(gai)復(fu)合(he)物(wu)沉淀(dian)(dian)黏附在細(xi)胞膜表面，通過細(xi)胞的(de)內(nei)吞作用而使(shi)DNA被(bei)細(xi)胞捕(bu)獲。沉淀(dian)(dian)顆粒的(de)大小和質量(liang)對(dui)于(yu)轉染的(de)成功至關重(zhong)要，也(ye)受(shou)pH值、鈣(gai)離子濃度、DNA濃度、沉淀(dian)(dian)反應時間、細(xi)胞孵育時間等(deng)因素影響。可適(shi)用于(yu)穩轉瞬轉，操作簡(jian)便花費相對(dui)較低(di)，但轉染效率低(di)，10-20%，并且重(zhong)復(fu)性很差(cha)。
2）陽離子(zi)聚(ju)合(he)(he)物(wu)(wu)法：帶正(zheng)電(dian)的聚(ju)合(he)(he)物(wu)(wu)與核(he)酸帶負(fu)電(dian)的磷酸基團形(xing)成帶正(zheng)電(dian)的復(fu)合(he)(he)物(wu)(wu)后與細(xi)胞(bao)表面帶負(fu)電(dian)的蛋白多糖相互作用(yong)，并通過內吞(tun)作用(yong)進入(ru)細(xi)胞(bao)。具有(you)陽離子(zi)脂質體的轉(zhuan)染效率高(gao)，操作簡(jian)單，適用(yong)范圍廣(guang)，重復(fu)性好等特點外，還具有(you)在(zai)體內轉(zhuan)染效率高(gao)，細(xi)胞(bao)毒(du)性低等特點。
3）脂(zhi)質體轉染(ran)(ran)(ran)：帶(dai)正電的(de)(de)脂(zhi)質體與帶(dai)負電的(de)(de)核酸(suan)磷酸(suan)基(ji)團形(xing)成(cheng)DNA-陽離子脂(zhi)質體復合物，再與細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)膜(mo)上(shang)的(de)(de)唾液(ye)酸(suan)殘(can)基(ji)的(de)(de)負電核結合，可(ke)能經過內(nei)吞作用(yong)被導入(ru)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)。該(gai)方法使用(yong)簡單，可(ke)攜帶(dai)大(da)片段DNA，通用(yong)于各(ge)種類型(xing)(xing)的(de)(de)裸露DNA或RNA，能轉染(ran)(ran)(ran)各(ge)種類型(xing)(xing)的(de)(de)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)，轉染(ran)(ran)(ran)效率、轉染(ran)(ran)(ran)的(de)(de)穩定性和可(ke)重復性大(da)大(da)提(ti)高(gao)。但轉染(ran)(ran)(ran)時需要去除血(xue)(xue)清，血(xue)(xue)清的(de)(de)缺失會導致(zhi)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)毒性增(zeng)加；轉染(ran)(ran)(ran)效果也隨(sui)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)類型(xing)(xing)變化大(da)。
2. 物(wu)理(li)物(wu)質(zhi)介(jie)導：電穿孔法、顯微注射(she)和基因槍
1）電(dian)穿(chuan)孔法：電(dian)穿(chuan)孔是(shi)通(tong)過高強度的電(dian)場作用(yong)破壞細(xi)(xi)胞膜電(dian)位，瞬(shun)時提高細(xi)(xi)胞膜的通(tong)透性(xing)，從而吸收周圍(wei)介(jie)質中的外(wai)源分子。電(dian)穿(chuan)孔法可適用(yong)于所有細(xi)(xi)胞類(lei)型的瞬(shun)時和(he)穩定轉染(ran)，但(dan)是(shi)其高電(dian)壓脈沖導致(zhi)細(xi)(xi)胞致(zhi)死率非常高，并(bing)且對DNA和(he)細(xi)(xi)胞的用(yong)量很大(da)。
2）顯微注(zhu)射：需要(yao)使(shi)用精密(mi)的(de)儀(yi)器，直接將外(wai)源性核酸注(zhu)射至(zhi)宿(su)主細(xi)胞(bao)核內。多用于(yu)轉(zhuan)(zhuan)基因，由宿(su)主基因組序列可能發(fa)生的(de)重組，缺失，復制或(huo)者(zhe)異位等現象使(shi)外(wai)源基因嵌(qian)入(ru)宿(su)主的(de)染色(se)體中。但是(shi)轉(zhuan)(zhuan)染細(xi)胞(bao)數(shu)有(you)限,多用于(yu)工程(cheng)改造或(huo)轉(zhuan)(zhuan)基因動物的(de)胚胎細(xi)胞(bao)。
3）基因槍法：又名(ming)生(sheng)物彈(dan)道技(ji)術(shu)(Biolistic Technology)，用(yong)壓縮氣(qi)體(氦或氮等(deng))動力產(chan)生(sheng)一(yi)種(zhong)冷的(de)(de)氣(qi)體沖擊波進入(ru)轟擊室，把粘有DNA的(de)(de)細(xi)微金粉打向細(xi)胞(bao)(bao)(bao)，穿(chuan)過細(xi)胞(bao)(bao)(bao)壁、細(xi)胞(bao)(bao)(bao)膜、細(xi)胞(bao)(bao)(bao)質(zhi)等(deng)層(ceng)層(ceng)構造到達細(xi)胞(bao)(bao)(bao)核，完成基因轉移。該方法可(ke)用(yong)于人(ren)的(de)(de)表皮細(xi)胞(bao)(bao)(bao)，纖維原細(xi)胞(bao)(bao)(bao)，淋巴細(xi)胞(bao)(bao)(bao)系(xi)以及原代(dai)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)，不易毒害細(xi)胞(bao)(bao)(bao)，但是轉化(hua)效率(lv)較低。
3. 生物物質(zhi)介導(dao)：病毒介導(dao)法
1）逆轉錄(lu)病毒(RNA)：通過病毒侵(qin)染宿(su)主細(xi)胞(bao)(bao)的(de)(de)機制(zhi)將外(wai)源(yuan)基因(yin)整合到(dao)宿(su)主細(xi)胞(bao)(bao)的(de)(de)染色體(ti)中，導致基因(yin)失活或激(ji)活癌(ai)基因(yin)，構建穩(wen)轉株。可(ke)以用于難轉染的(de)(de)細(xi)胞(bao)(bao)，原代細(xi)胞(bao)(bao)，體(ti)內細(xi)胞(bao)(bao)等，但攜帶基因(yin)不(bu)能(neng)太大（<8kb）:,需(xu)考慮安(an)全因(yin)素。
2）腺(xian)病(bing)毒(雙鏈DNA)：腺(xian)病(bing)毒除了卵細胞以外幾乎在所有已知細胞中(zhong)都不整合到染色體中(zhong)，因此不會(hui)干擾其它的(de)宿主(zhu)基(ji)因。瞬時表達(da)，可(ke)以包裝8kb左右外源基(ji)因，轉染較(jiao)容易(yi)，但是轉染效(xiao)率不高(gao)。
細胞轉染實驗作為一種重要的實驗手段，為我們探索細胞內的奧秘提供了有效的工具。根據實驗需求和細胞特性，選擇合適的轉染方法非常重要。像細胞狀態和密度、培養基、載體大小等多方面因素都會影響到我們之后的轉染效率，所以細胞轉染是一個常見但是卻并不簡單的實驗。
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