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實驗方法：胺法

標 本：分泌物

規 格：20T

操作步驟：
用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法
1.　包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1～10μg／ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡稱洗滌，下同）。
2.　加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中，置37℃ 孵育1小時。然后洗滌。（同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）。
3.　加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體（經滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌。
4.　加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
5.　終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。
6.　結果判定(ding)：可于白色(se)(se)背景上(shang)，直接用肉眼(yan)觀察結果：反應(ying)(ying)孔(kong)內(nei)顏(yan)色(se)(se)越深(shen)，陽性(xing)(xing)程度越強，陰性(xing)(xing)反應(ying)(ying)為無色(se)(se)或極(ji)淺，依據所(suo)呈顏(yan)色(se)(se)的深(shen)淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值(zhi)(zhi)：在ELISA檢(jian)測儀上(shang)，于450nm（若(ruo)以ABTS顯色(se)(se)，則410nm）處，以空白對照孔(kong)調零后測各孔(kong)OD值(zhi)(zhi)，若(ruo)大(da)于規定(ding)的陰性(xing)(xing)對照OD值(zhi)(zhi)的2.1倍，即為陽性(xing)(xing)。

elisa產品范圍: 人,小大鼠,豬,兔,其它動物細胞因子;細胞凋亡,活性多肽,自身抗體 ,血栓與止血, 骨代謝,肝纖維化,腫瘤,激素內分泌,自身抗體科研ELISA檢測試劑盒
待檢樣本：體液，血清，血漿，細胞培養上清液，尿液，組織勻漿,心房水標本等等。
保存條件：2-8℃

試驗原理：
 　　試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗（ELISA）.已知濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關系。
自備材料：
1． 蒸餾水。
2． 加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3． 振蕩器及磁力攪拌器等。
安全性
1． 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
2． 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
操作注意事項：
1． 試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
2． 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。
3． 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
4． 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
5． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6． 洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
7． 底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
8． 加入試劑的順序應一致，以所有反應板孔溫育的時間一樣。
9． 按照說明(ming)(ming)書中(zhong)標明(ming)(ming)的時間、加液的量及順序進(jin)行(xing)溫育(yu)操作。

更(geng)新(xin)時間：2024/3/20 8:56:24