在科研實(shi)(shi)驗技術方(fang)面，恒(heng)遠生(sheng)物為(wei)了(le)幫(bang)助初學者快速(su)上(shang)手(shou)，減少摸(mo)索苦惱，門為(wei)大家準備了(le)一套標準的實(shi)(shi)驗流程和技巧。檢測(ce)實(shi)(shi)驗樣本，ELISA、WB、IHC選哪(na)個(ge)？看完(wan)這篇你就知道了(le)。?
IHC：
IHC免(mian)(mian)疫組化(hua)抗(kang)(kang)(kang)原(yuan)技術(shu)是應(ying)用免(mian)(mian)疫學(xue)基本原(yuan)理——抗(kang)(kang)(kang)原(yuan)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)反應(ying)，即(ji)抗(kang)(kang)(kang)原(yuan)與抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)特異性結合(he)的(de)原(yuan)理，通(tong)過化(hua)學(xue)反應(ying)使標記抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)的(de)顯色劑(ji)（熒(ying)光素(su)、酶、金屬離子(zi)、同位素(su)）顯色來確定(ding)組織細胞(bao)內抗(kang)(kang)(kang)原(yuan)（多肽(tai)和(he)蛋(dan)白質），對(dui)其(qi)進(jin)行定(ding)位、定(ding)性及相(xiang)對(dui)定(ding)量(liang)的(de)研究，稱為免(mian)(mian)疫組織化(hua)學(xue)技術(shu)或免(mian)(mian)疫細胞(bao)化(hua)學(xue)技術(shu)。
ELISA（酶聯免疫吸附試驗）：
ELISA用(yong)到(dao)了(le)免(mian)疫(yi)學原(yuan)理和(he)化(hua)學反應顯色，待測的(de)樣(yang)品(pin)多是(shi)(shi)血清、血漿、尿(niao)液(ye)、細(xi)胞或組(zu)織(zhi)培養上(shang)清液(ye)，因(yin)而(er)沒有用(yong)到(dao)組(zu)織(zhi)包(bao)埋、切片等(deng)技術，這是(shi)(shi)與(yu)免(mian)疫(yi)組(zu)化(hua)的(de)主要(yao)區別，操作(zuo)上(shang)開(kai)始需要(yao)將抗(kang)原(yuan)或抗(kang)體結合到(dao)固(gu)相(xiang)載體表面，從而(er)使后(hou)來形(xing)成的(de)抗(kang)原(yuan)-抗(kang)體-酶-底物復合物粘附(fu)在載體上(shang)，這就是(shi)(shi)“吸附(fu)”的(de)含義。免(mian)疫(yi)組(zu)化(hua)和(he)elisa所(suo)用(yong)到(dao)的(de)原(yuan)理大致相(xiang)同，只是(shi)(shi)因(yin)為所(suo)檢測的(de)樣(yang)品(pin)不同，從而(er)在操作(zuo)方法上(shang)有所(suo)不同。elisa多用(yong)于定量分析，其靈(ling)敏度(du)非常高。
Western bolt:
是將(jiang)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)轉移(yi)到膜上，然后利用抗(kang)(kang)體(ti)(ti)進行檢測。對已知(zhi)表達(da)(da)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)，可(ke)用相應抗(kang)(kang)體(ti)(ti)作(zuo)為一抗(kang)(kang)進行檢測，對新基因的(de)(de)(de)(de)表達(da)(da)產物，可(ke)通過融合部分的(de)(de)(de)(de)抗(kang)(kang)體(ti)(ti)檢測。可(ke)以(yi)用于(yu)定性和(he)半定量。WesternBlot采用的(de)(de)(de)(de)是聚(ju)丙(bing)烯酰胺凝膠電泳(yong)，被檢測物是蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)，“探針”是抗(kang)(kang)體(ti)(ti)，“顯色”用標記(ji)的(de)(de)(de)(de)二抗(kang)(kang)。經(jing)過PAGE分離(li)的(de)(de)(de)(de)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)樣(yang)品(pin)，轉移(yi)到固(gu)(gu)相載體(ti)(ti)（例如硝酸(suan)纖維素(su)薄膜）上，固(gu)(gu)相載體(ti)(ti)以(yi)非(fei)共價鍵形(xing)式吸附蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)，且能保持電泳(yong)分離(li)的(de)(de)(de)(de)多肽類型及其生物學活(huo)性不變(bian)。以(yi)固(gu)(gu)相載體(ti)(ti)上的(de)(de)(de)(de)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)或(huo)多肽作(zuo)為抗(kang)(kang)原，與(yu)對應的(de)(de)(de)(de)抗(kang)(kang)體(ti)(ti)起免疫(yi)反應，再與(yu)酶或(huo)同位素(su)標記(ji)的(de)(de)(de)(de)第二抗(kang)(kang)體(ti)(ti)起反應，經(jing)過底物顯色或(huo)放射(she)自顯影以(yi)檢測電泳(yong)分離(li)的(de)(de)(de)(de)特異性目的(de)(de)(de)(de)基因表達(da)(da)的(de)(de)(de)(de)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)成分。該(gai)技術也廣泛應用于(yu)檢測蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)水(shui)平的(de)(de)(de)(de)表達(da)(da)。
1.對于IHC來說，定位是免疫組化的優勢
該方法(fa)可(ke)在(zai)組織(zhi)和(he)細(xi)胞中進(jin)(jin)行抗(kang)原的準(zhun)確定(ding)位, 因而可(ke)同(tong)時對不同(tong)抗(kang)原在(zai)同(tong)一組織(zhi)或細(xi)胞中進(jin)(jin)行定(ding)位觀(guan)察，這樣就可(ke)以進(jin)(jin)行形態與功能(neng)相(xiang)結(jie)合(he)的研(yan)(yan)(yan)究(jiu)(jiu)，相(xiang)比(bi)于其(qi)(qi)他(ta)蛋白檢測方法(fa)，免疫組化具有(you)(you)定(ding)位較直接(jie)準(zhun)確、定(ding)性靈敏度高，是(shi)定(ding)位檢測分析方法(fa)對病理學(xue)域開展深入研(yan)(yan)(yan)究(jiu)(jiu)是(shi)十分有(you)(you)意義，尤其(qi)(qi)對于有(you)(you)些因子的轉位研(yan)(yan)(yan)究(jiu)(jiu)十分有(you)(you)用。
2.WB與IHC技術相比，定量可能更加準確
當然WB也可定(ding)性和定(ding)位（通過(guo)提取膜(mo)蛋白或(huo)核蛋白、胞漿蛋白分別(bie)檢測其中抗原(yuan)含量，進而間(jian)接反(fan)映它(ta)們的定(ding)位），但敏感性遠遠低(di)于IHC。
3.ELISA與IHC相比，定量準確，是分泌性蛋白檢測方法
尤其對于微定量(liang)(liang)分析(xi)多個樣(yang)(yang)本(ben)非常(chang)有用，所用試(shi)劑和(he)樣(yang)(yang)品量(liang)(liang)很少，結(jie)果準確。IHC針(zhen)對性(xing)比(bi)較(jiao)強，而且一般(ban)是以(yi)(yi)組織(zhi)或者細胞為樣(yang)(yang)本(ben)，而ELISA一般(ban)是使(shi)用血清(qing)或者組織(zhi)磨(mo)碎液。免(mian)疫組化可以(yi)(yi)快速檢測樣(yang)(yang)本(ben)中(zhong)抗(kang)體的陽性(xing)或者陰(yin)性(xing)，一般(ban)不用于定量(liang)(liang)檢測。
4.WB和ELISA的區別
WB：可(ke)以看到特(te)異性的條帶，但是定量(liang)比(bi)較煩
ELISA：可以直(zhi)接讀出(chu)濃(nong)度，但(dan)是如果抗體有非特異性(xing)結合，那得(de)到的(de)數(shu)值就(jiu)不(bu)可信。
WB：只能半(ban)定量(liang),但是(shi)可(ke)以檢測細胞膜蛋白,這點elisa做不到
ELISA：可用定量(liang)方(fang)法(fa)檢測(ce)蛋白(bai),也就是說可以觀察不(bu)同濃度(du)刺激物對目的蛋白(bai)的影響
WB：所(suo)檢測的一般是(shi)抗(kang)(kang)原(yuan)，而elisa抗(kang)(kang)原(yuan)抗(kang)(kang)體都可以檢測。
更多實驗資訊可咨詢我司業務員或者關注“恒遠生物”微信公眾號。上海恒遠生物科技有限公司擁有自己的實驗室，備有業的技術研發團隊，注于ELISA試劑盒的研發與銷售，實驗提供免費代測服務，并提供精湛的技術服務，如果您有實驗上的問題歡迎來咨詢，為您提供業的一對一技術指導。
原創作者：上海恒遠生(sheng)物科技有限公司
總(zong)訪問量：7387230 
