ELISA試(shi)劑(ji)(ji)盒以其靈敏(min)度較高，特異性好的特點已廣泛用(yong)于科研(yan)(yan)實驗(yan)研(yan)(yan)究，越(yue)來越(yue)多(duo)的科研(yan)(yan)單位和(he)高校畢(bi)業論文都選擇用(yong)ELISA試(shi)劑(ji)(ji)盒作為研(yan)(yan)究課題。但在(zai)實驗(yan)中也有很多(duo)小(xiao)細節會影響到實驗(yan)結(jie)果，下面就(jiu)和(he)大(da)家(jia)談談實驗(yan)室(shi)中ELISA試(shi)劑(ji)(ji)盒的注意事項(xiang)。
1.適宜的溫(wen)度
血(xue)清(qing)標(biao)本(ben)(ben)宜在(zai)(zai)新鮮(xian)(xian)時(shi)檢(jian)測(ce)(ce)，嚴(yan)重溶血(xue)標(biao)本(ben)(ben)禁用(yong)。一(yi)般說來，在(zai)(zai)5天內測(ce)(ce)定(ding)的血(xue)清(qing)標(biao)本(ben)(ben)可(ke)(ke)放(fang)置于4℃，標(biao)本(ben)(ben)在(zai)(zai)冰箱中保(bao)存時(shi)間過(guo)長導致血(xue)清(qing)IgG聚(ju)合(he)，使間接(jie)法的試(shi)(shi)劑本(ben)(ben)底加深(shen)。超過(guo)一(yi)周測(ce)(ce)定(ding)的需－20℃保(bao)存。在(zai)(zai)建立ELISA方(fang)法作反應(ying)動力學(xue)研究時(shi)，實驗表(biao)明，兩次抗(kang)原抗(kang)體反應(ying)一(yi)般在(zai)(zai)37℃經1-2小時(shi)，產物的生成(cheng)可(ke)(ke)達(da)頂峰。為避免蒸發，板(ban)上(shang)(shang)應(ying)加蓋(gai)，也可(ke)(ke)用(yong)塑料貼(tie)封(feng)紙或(huo)保(bao)鮮(xian)(xian)膜(mo)覆蓋(gai)板(ban)孔，反應(ying)板(ban)不宜疊放(fang)，以(yi)確(que)定(ding)各板(ban)的溫度(du)都(dou)能迅速平衡。應(ying)注意(yi)溫育(yu)的溫度(du)和時(shi)間應(ying)按規定(ding)力求準確(que)。由于公司的試(shi)(shi)劑盒溫育(yu)是(shi)在(zai)(zai)空氣浴中完成(cheng)，采用(yong)水(shui)浴會造(zao)成(cheng)值(zhi)偏(pian)高(gao)或(huo)花板(ban)。另外溫育(yu)中還有邊(bian)緣(yuan)效應(ying)，邊(bian)上(shang)(shang)的值(zhi)會偏(pian)高(gao)，建議為了客觀的判斷結果，將質控放(fang)在(zai)(zai)非邊(bian)緣(yuan)位置。
2.如(ru)何(he)處理(li)
凍(dong)結血(xue)清融解后，蛋(dan)白質局部濃縮，分(fen)布(bu)不均(jun)，應充分(fen)混勻并避免產生氣泡。混濁或有沉淀的血(xue)清標(biao)本應先離心或過濾，澄清后再(zai)檢測(ce)。反復凍(dong)融會(hui)(hui)使(shi)抗(kang)體效價跌(die)落，所以(yi)測(ce)抗(kang)體的血(xue)清標(biao)本如(ru)需保(bao)存作多次檢測(ce)，宜少量(liang)分(fen)裝(zhuang)冰存；使(shi)用一次性玻璃試管或真空(kong)管采(cai)血(xue)管；并使(shi)用非(fei)抗(kang)凝標(biao)本，肝素(su)抗(kang)凝血(xue)漿(jiang)會(hui)(hui)增加(jia)OD值，可能與高濃度(du)肝素(su)具有強大的負電荷(he)能吸附(fu)酶標(biao)記物不易洗脫有關；EDTA、酶抑制劑（如(ru)NaN3）可抑制ELISA系統中辣根過氧化物酶活性。
3.關于采(cai)集
血(xue)液標本(ben)采(cai)(cai)集后必須使其充(chong)分凝固后再分離(li)血(xue)清，或標本(ben)采(cai)(cai)集時用帶分離(li)膠的采(cai)(cai)血(xue)管或于采(cai)(cai)血(xue)管中加入適(shi)當的促凝劑(ji)。
4.有效期
通常在(zai)沒有開封，有效期為(wei)6個月(yue)，但根據(ju)實(shi)驗需(xu)求，試劑(ji)盒內酶標條(tiao)可拆卸，按實(shi)驗需(xu)求可分(fen)多次使(shi)用(yong)；使(shi)用(yong)后(hou)(hou)的剩(sheng)余試劑(ji)盒建議在(zai)實(shi)驗后(hou)(hou)1個月(yue)內使(shi)用(yong)完畢。產(chan)品過期時間以盒子上的標簽為(wei)準，保質期內所(suo)有組分(fen)都確保是穩(wen)定的。
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