ELISA常(chang)見問題與解決(jue)方法
1. 陰性對照出現陽(yang)性結(jie)果
① 樣品、試劑被污(wu)染，或(huo)加樣時操(cao)作不當導(dao)致相(xiang)鄰孔之間溶液濺灑出現交叉污(wu)染——更換試劑，小(xiao)心(xin)操(cao)作。
② 酶標板洗滌不干凈——洗板先將抗體溶液倒干凈，然后清洗液倒滿板孔，確保能充分洗滌。
③ 抗體(ti)量過多導致非特異(yi)性結(jie)合——根(gen)據說明書(shu)的推(tui)薦(jian)量使用抗體(ti)，稀釋抗體(ti)到適當(dang)濃度。
2．酶標板整體背景高
① 抗體非(fei)特異(yi)(yi)性(xing)結(jie)(jie)合——應確保板(ban)孔(kong)進行了封閉并且使用的是(shi)恰當(dang)的封閉液以防止非(fei)特異(yi)(yi)性(xing)結(jie)(jie)合。
② 底物結合濃(nong)度過高(gao)——對底物進行適當稀釋。
③ 反應時(shi)間過長——當酶標板顯色足夠進行(xing)吸光度(du)讀數時(shi)立即使用終(zhong)止液終(zhong)止反應，適(shi)當縮短顯色時(shi)間。
④ 底(di)物溶(rong)液(ye)(ye)污(wu)染——正常(chang)底(di)物溶(rong)液(ye)(ye)應是澄(cheng)清透明的(de)，若出現黃色或其他顏色表明受到污(wu)染，應更換新的(de)底(di)物溶(rong)液(ye)(ye)。
⑤ 底物孵育過程(cheng)沒有避光(guang)——底物孵育應在避光(guang)條件(jian)下進行。
3. 復(fu)(fu)孔(kong)之間重復(fu)(fu)性差
① 樣品數量不整齊，加樣時間有長有短——加重復孔時盡量保持加樣時間與次接近。
② 加樣量不一致——樣品稀釋應(ying)充分(fen)混(hun)勻，并(bing)且使用同一移(yi)液槍。
③ 洗滌條件、操作(zuo)人(ren)員不一(yi)致——重(zhong)復測定樣品時，操作(zuo)條件、人(ren)員應盡(jin)可能(neng)與(yu)上次保持一(yi)致。
4. 吸光值偏高或偏低
① 樣品中待測抗原含量太低(di)會導致(zhi)測定結果偏低(di)——可嘗試增加樣品使用(yong)量。
② 加入(ru)抗體量(liang)不(bu)合(he)適(shi)會造成結果偏低或(huo)偏高——使用建議抗體量(liang)或(huo)為了使結果更好盡(jin)可(ke)能調(diao)整抗體的適(shi)用量(liang)。
③ 孵育(yu)時間太短導致(zhi)檢(jian)測(ce)結果偏低——適(shi)當延長抗(kang)體或抗(kang)原的孵育(yu)時間，確保待測(ce)樣品與檢(jian)測(ce)抗(kang)體能(neng)充分結合。
④ 孵育溫度不適合——應確定抗體在適宜條件下進行孵育（一般37℃孵育1h）。
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