【產品名稱】:大鼠抑制素結合蛋白試劑盒

【敏(min)感(gan)性】： ＜5pg/ml

【特(te)異性】： 系統和其(qi)它(ta)細胞因子無交叉反應。

【保存】： -20℃ [短(duan)期內(nei)（如(ru)兩周）可(ke)4℃]

【有效(xiao)期(qi)】： 12個月（-20℃）。

【用途(tu)】： 用于體外定量(liang)分析(xi)液體標本（通用型）。

標本收集:

1.血(xue)清(qing)：全血(xue)標(biao)本請(qing)于室溫放(fang)置(zhi)2小(xiao)時或(huo)4℃過夜(ye)后于1000×g離心(xin)20分鐘，取上清(qing)即可檢測，收集血(xue)液的(de)試管應為一(yi)次(ci)性的(de)無熱原，無內毒素試管。

2.血(xue)漿：抗凝劑推薦使用(yong)EDTA，標本(ben)采(cai)集后30分鐘內于 1000×g離心15分鐘，取上清(qing)即可檢測。避免使用(yong)溶(rong)血(xue)，高血(xue)脂標本(ben)。

3. 其它(ta)生物標本：1000×g離心20分鐘，取上清即(ji)可檢測

4. 標(biao)本應(ying)清澈透明，懸浮物(wu)應(ying)離心(xin)去除(chu)。

5.標本(ben)收集后若不及時檢(jian)測，請按(an)一次使用量分(fen)裝，凍存于-20℃/-80℃電(dian)冰箱內(nei)，避免反復(fu)凍融，1-6月內(nei)檢(jian)測,4℃保存的應在1周內(nei)進(jin)行檢(jian)測。

6. 如果您的樣本中檢測物濃度高于標準品值，請根據實際情況，做適當倍數稀釋（建議先做預實驗，以確定稀釋倍數）。

試驗所需自備物品:

1.  酶標(biao)儀（450nm波長濾光片）

2.  高精度移液器，EP管及一次(ci)性吸頭：0.5-10μl, 2-20μl, 20-200μl, 200-1000μl

3.  37℃恒溫箱, 雙蒸水或去離(li)子水

4.  吸(xi)水紙

檢測前準備工作:

1. 請提前20分鐘從冰(bing)箱(xiang)中取(qu)出試劑盒，平衡至(zhi)室溫。

2. 將濃(nong)縮洗滌(di)液(ye)用(yong)雙蒸水(shui)稀(xi)釋（1:25）。未用(yong)完(wan)的放回4℃。從冰箱中取出的濃(nong)縮洗滌(di)液(ye)可能有結晶(jing)，屬于正常現象，可用(yong)40℃水(shui)浴微加熱使結晶(jing)完(wan)全溶解(jie)后再配制(zhi)洗滌(di)液(ye)。（加熱溫度不要超過50℃）使用(yong)時洗滌(di)液(ye)應為室溫。

3.  標(biao)準(zhun)(zhun)品: 加入標(biao)準(zhun)(zhun)品&標(biao)本稀(xi)釋液(ye)1.0ml至凍干標(biao)準(zhun)(zhun)品中(zhong)(zhong)，靜置10分鐘，待(dai)其(qi)充(chong)分溶(rong)解后(hou)，輕輕混(hun)(hun)勻（濃(nong)度(du)為5000 pg/ml）。然后(hou)根(gen)據需要進(jin)行倍比稀(xi)釋（注：不要直接在板中(zhong)(zhong)進(jin)行倍比稀(xi)釋）。建(jian)議配制成(cheng)以下濃(nong)度(du)： 2500、1250、625、312.5、156.2、78.1、39.05、0 pg/ml。樣品稀(xi)釋液(ye)直接作為空(kong)白孔 0 pg/ml。如配制2500pg/ml標(biao)準(zhun)(zhun)品：取0.5ml （不要少于(yu)0.5ml ）5000pg/ml的上述標(biao)準(zhun)(zhun)品加入含(han)有0.5ml樣品稀(xi)釋液(ye)的EP管中(zhong)(zhong)，混(hun)(hun)勻即可，其(qi)余濃(nong)度(du)以此類推。

4. 生物(wu)素化(hua)(hua)抗體工作(zuo)液：實驗前(qian)計(ji)算(suan)當(dang)次(ci)實驗所需(xu)用量（以100μl/孔計(ji)），實際配制時應多配制100-200μl。使用前(qian)15分鐘(zhong)，以生物(wu)素化(hua)(hua)抗體稀釋液稀釋濃縮(suo)生物(wu)素化(hua)(hua)抗體（1:100）成(cheng)工作(zuo)濃度。當(dang)日使用。

5. 酶結(jie)合物工作液：實驗前計算當次(ci)實驗所需用量（以100μl/孔計），實際(ji)配制時應多配制  100-200μl。使用前15分鐘(zhong)，以生(sheng)物素化(hua)抗(kang)體稀(xi)釋液稀(xi)釋濃(nong)縮生(sheng)物素化(hua)抗(kang)體（1:100）成工作濃(nong)度。當日使用。

洗滌方法:

1. 自動洗板(ban)機：每孔加入洗滌液350μl，注入與吸(xi)出間隔60秒。洗板(ban)5次。

2. 手工洗(xi)板(ban)：甩(shuai)盡孔內液體，在潔凈的(de)吸(xi)水(shui)紙上(shang)拍干，每孔加(jia)洗(xi)滌液350μl，浸泡1-2分鐘，吸(xi)去（不(bu)可觸及板(ban)壁）或甩(shuai)掉酶標(biao)板(ban)內的(de)液體，在厚的(de)吸(xi)水(shui)紙上(shang)拍干。洗(xi)板(ban)5次。

大鼠抑制素結合蛋白試劑盒操作步驟:

實驗開始(shi)前，各(ge)試(shi)劑均應平衡至(zhi)室溫；試(shi)劑或樣品配制時，均需充分(fen)混勻(yun)，并盡量避免起泡(pao)。

1、 加(jia)樣(yang)：分別(bie)設空白孔(kong)(kong)(kong)、標準孔(kong)(kong)(kong)、待測樣(yang)品(pin)(pin)(pin)孔(kong)(kong)(kong)。空白孔(kong)(kong)(kong)加(jia)樣(yang)品(pin)(pin)(pin)稀釋液(ye)100μl，余孔(kong)(kong)(kong)分別(bie)加(jia)標準品(pin)(pin)(pin)或待測樣(yang)品(pin)(pin)(pin)100μl，注意(yi)不要有氣泡，加(jia)樣(yang)時(shi)將(jiang)樣(yang)品(pin)(pin)(pin)加(jia)于酶(mei)標板底部，盡量不觸及孔(kong)(kong)(kong)壁，輕(qing)輕(qing)晃動混勻。給酶(mei)標板覆(fu)膜，37℃孵(fu)育2小時(shi)。為(wei)保(bao)證實(shi)驗結果有效(xiao)性(xing)，每次實(shi)驗請(qing)使用新的標準品(pin)(pin)(pin)溶液(ye)。

2、 棄(qi)去液體，甩干，每(mei)個孔中加入Detection Ab工作液 100μl（在使(shi)用前15分鐘(zhong)內配(pei)制），酶標板(ban)加上覆膜，37℃溫育1小時。

3、 棄去孔(kong)內液(ye)體，甩(shuai)干(gan)，洗板 3次(ci)，每(mei)次(ci)浸泡1-2分(fen)鐘，大約350μl /每(mei)孔(kong)，甩(shuai)干(gan)并在吸水紙上輕拍將孔(kong)內液(ye)體拍干(gan)。

4、 每(mei)孔加HRP Conjugate工作(zuo)液(ye)（臨用前15分鐘內配制）100μl，加上覆膜，37℃溫育1小時。

5、 棄去孔內液體，甩干，洗板5次，方法同(tong)步驟3。

6、 每孔(kong)加底物溶液100μl，酶標(biao)(biao)板加上覆(fu)膜(mo)37℃避光(guang)孵育15分(fen)鐘左右（根據實際顯色(se)情況酌情縮短或延長，但不(bu)可(ke)超過30分(fen)鐘。當(dang)標(biao)(biao)準孔(kong)出現(xian)明(ming)顯梯度(du)時，即可(ke)終止）。

7、 每孔(kong)加終止(zhi)液50μl，終止(zhi)反應(ying)，此時藍色立轉(zhuan)黃(huang)色。終止(zhi)液的加入順序應(ying)盡量(liang)與底(di)物液的加入順序相(xiang)同。

8、 立(li)即(ji)用(yong)酶標(biao)儀(yi)在(zai)450nm波長測(ce)量(liang)各孔的(de)光密度（OD值）。應提前打開酶標(biao)儀(yi)電源，預熱，設置好檢(jian)測(ce)程序。

9、 實驗(yan)完(wan)畢后將未用完(wan)的(de)試劑按規定的(de)保存溫度放回(hui)冰箱保存至有效期結束(shu)。

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更新(xin)時間(jian)：2024/4/18 9:12:46