Elisa試驗(yan)是一種敏感性(xing)高，特異性(xing)強(qiang)，重復性(xing)好(hao)的(de)實驗(yan)診斷(duan)方法。由于(yu)其(qi)試劑(ji)穩定、易保存(cun)，操作(zuo)簡便，結果判(pan)斷(duan)較客(ke)觀等(deng)因(yin)素，已廣泛應(ying)用在免疫學檢(jian)驗(yan)的(de)各領域中。依次加入標本(ben)、標準品(pin)、HRP標記(ji)的(de)檢(jian)測(ce)(ce)抗(kang)體(ti)，經過溫育并徹(che)底(di)洗滌。用底(di)物TMB顯色，TMB在過氧化物酶(mei)的(de)催化下轉(zhuan)化成藍色，并在酸的(de)作(zuo)用下轉(zhuan)化成*終的(de)黃色。用酶(mei)標儀(yi)在450nm 波(bo)長下測(ce)(ce)定吸光度（OD 值），計算樣品(pin)濃度。

BIM試劑盒,大鼠γ干擾素(IFN-γ)ELISA試劑盒樣品收集、處理及保存方法

1.  血(xue)清(qing)：使用不(bu)含熱原(yuan)和內(nei)毒(du)素的試管，操作過(guo)程中避(bi)免任何細(xi)胞刺激(ji)，收集血(xue)液后，3000轉離(li)心10分鐘將血(xue)清(qing)和紅細(xi)胞迅速小(xiao)心地分離(li)。

2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或(huo)其他抗凝。3000轉離心30分(fen)鐘取(qu)上(shang)清。

3.  細胞上清液：3000轉離(li)心10分(fen)鐘去除顆(ke)粒和聚合物。

4.  組織勻漿：將(jiang)組織加入(ru)適量生理鹽(yan)水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。

5.  保存(cun)：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍(dong)存(cun)于-20℃，避免反復凍(dong)融，在室溫下解(jie)凍(dong)并確保樣品均(jun)勻地充分解(jie)凍(dong)。

自備物品

1.     酶標儀(yi)（450nm）

2.     高精(jing)度加樣(yang)器(qi)及(ji)槍頭(tou)：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.     37℃恒(heng)溫箱(xiang)

注意事項
BIM試劑盒,大鼠γ干擾素(IFN-γ)ELISA試劑盒操作注意事項

1.  試(shi)劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘(zhong)。從(cong)冰箱取(qu)出(chu)的濃縮洗滌液會有結(jie)晶(jing)，這屬于正常(chang)現(xian)象，水浴加(jia)熱使結(jie)晶(jing)完全溶解(jie)后(hou)再使用。

2.  實驗中不用的板條(tiao)應立即放回(hui)自封(feng)袋中，密封(feng)（低溫干燥(zao)）保存。

3.  標準品(pin)稀(xi)釋液即(ji)可視為陰性(xing)對照(zhao)或(huo)者空白；預處(chu)理后的(de)樣本(ben)無需稀(xi)釋，直(zhi)接取10μL加(jia)樣即(ji)可。

4.  嚴格按照(zhao)說(shuo)明書中(zhong)標明的時間、加液量及(ji)順(shun)序進行溫(wen)育操作。

5.  所有(you)液體組分使用前充(chong)分搖勻。

試劑盒組成

注：標準品(pin)用標準品(pin)稀釋(shi)(shi)液依次稀釋(shi)(shi)為：80、40、20、10、5、2.5 pg/ml

試劑的(de)準備

 20×洗滌(di)緩沖液的稀釋：蒸餾(liu)水(shui)按1：20稀釋，即1份的20×洗滌(di)緩沖液加(jia)19份的蒸餾(liu)水(shui)。

洗板方法

1.  手(shou)工洗板：甩盡孔內液體(ti)，每孔加(jia)滿洗滌(di)液，靜(jing)置1min后甩盡孔內液體(ti)，在吸(xi)水(shui)紙(zhi)上(shang)拍干，如此(ci)洗板5次。

2.  自動洗(xi)板機：每(mei)孔注入(ru)洗(xi)液350μL，浸泡1min，洗(xi)板5次。

操作流程
BIM試劑盒,大鼠γ干擾素(IFN-γ)ELISA試劑盒操作步驟

1.  從室溫平衡20min后的鋁(lv)箔袋中(zhong)取出(chu)所需板條，剩余(yu)板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設置標準品(pin)孔(kong)(kong)和樣本孔(kong)(kong)，標準品(pin)孔(kong)(kong)各加不同濃度的標準品(pin)50μL；

3.  待(dai)測(ce)樣本(ben)孔先加待(dai)測(ce)樣本(ben)10μL，再加樣本(ben)稀(xi)釋液40μL；

4.  隨后標(biao)準品孔和樣本孔中每孔加入(ru)辣(la)根過(guo)氧化物酶(mei)（HRP）標(biao)記的(de)檢(jian)測抗體100μL，用封板膜(mo)封住反(fan)應孔，37℃水(shui)浴(yu)鍋(guo)或恒溫(wen)箱溫(wen)育60min。

5.  棄去液(ye)體，吸(xi)水(shui)紙(zhi)上拍(pai)干，每孔加(jia)滿洗(xi)滌液(ye)，靜置1min，甩(shuai)去洗(xi)滌液(ye)，吸(xi)水(shui)紙(zhi)上拍(pai)干，如此重(zhong)復洗(xi)板(ban)5次（也可用洗(xi)板(ban)機洗(xi)板(ban)）。

6.  每(mei)孔加入底(di)物A、B各(ge)50μL，37℃避光孵(fu)育(yu)15min。

7.  每孔(kong)加入終止液50μL，15min內，在(zai)450nm波長處測定各孔(kong)的OD值(zhi)。

結果判斷

 繪(hui)制標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)曲線：在(zai)Excel工作表中(zhong)，以標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)品濃度(du)作橫坐標(biao)(biao)(biao)，對應(ying)OD值作縱(zong)坐標(biao)(biao)(biao)，繪(hui)制出標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)品線性回(hui)歸(gui)曲線，按(an)曲線方(fang)程(cheng)計(ji)算(suan)各樣本(ben)濃度(du)值。

試(shi)劑盒性能

1.  準確性(xing)：標準品線性(xing)回(hui)歸與(yu)預(yu)期濃度(du)相關系數(shu)R值(zhi)，大于(yu)等于(yu)0.9900。

2.  靈敏度(du)：檢(jian)測濃(nong)度(du)小于1.0pg/ml。

3.  特異性：不與(yu)其(qi)它(ta)可溶(rong)性結構類似物交叉反應。

4.  重復性(xing)：板內、板間變異(yi)系數(shu)均小于15%。

5.  貯藏：2-8℃，避光防潮保存(cun)。

6.  有效期：6個(ge)月

BIM試劑盒,大鼠γ干擾素(IFN-γ)ELISA試劑盒免責聲明

1.   試劑盒僅(jin)供(gong)研(yan)究使用(yong)，不(bu)得用(yong)于臨床實驗(yan)或人體(ti)實驗(yan)，否則所產生的一切后果(guo)，由實驗(yan)者承(cheng)擔，本公司概不(bu)負責(ze)。

2. ;  嚴格按照說明(ming)書(shu)操作，實驗(yan)者違反說明(ming)書(shu)操作，后果由實驗(yan)者承擔(dan)。

更新時間：2023/8/27 12:36:25